УВЭЖХ-МСВР определение дансильных производных адреналина и дофамина в слюне человека

Abstract

В последнее десятилетие большой интерес вызывает определение катехоламинов в биологических жидкостях человека. Изменение эндогенных уровней таких катехоламинов, как адреналин и дофамин, в организме приводит к неврологическим нарушениям, а также ряду заболеваний, а именно болезни Альцгеймера и Паркинсона, нейроэндокринным катехоламинпродуцирующим опухолям – феохромоцитома, параганглиома, карциноидные опухоли и нейробластома. Кроме того, комбинации различных препаратов, могут приводить к искажениям в биологическом паспорте человека, включающего в себя не только сведения об эритропоезе и стероидном профиле, но и содержании ряда катехоламинов, определение которых также сопряжено с рядом трудностей как в части подготовки проб, так и их анализе. Предложена методика определения дансильных производных адреналина и дофамина в слюне человека, включающая дериватизацию и определение аналитов методом ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием высокого разрешения. Проведение процедуры дериватизации позволило получить менее полярные производные катехоламинов, что особенно важно для их количественного анализа в режиме обращенно-фазовой ультравысокоэффективной жидкостной хроматографии, поскольку обеспечивает их лучшее удерживание на сорбенте. Оценена чувствительность определения этих веществ предложенным методом, установлено, что наибольшей чувствительности можно добиться с использованием подвижной фазы, состоящей из 0.1 % водного раствора муравьиной кислоты и ацетонитрила. Нижняя граница определяемых концентраций составила 5 нг/мл для дансиладреналина, 10 нг/мл для дансилдофамина. Предложенная методика апробирована на реальных образцах слюны, полученных от добровольцев с целью установления содержания дансильных производных катехоламинов в режиме обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием высокого разрешения. Высокая чувствительность методики позволяет применять ее для определения адреналина и дофамина при клинической диагностике.

In the last decade, the quantification of catecholamines in human biological fluids has been of great interest. Changes in catecholamine levels, such as adrenaline and dopamine, in the body lead to neurological disorders as well as several diseases, namely Alzheimer’s and Parkinson’s diseases, neuroendocrine catecholamine - producing tumors - pheochromocytoma, paraganglioma, carcinoid tumors and neuroblastoma. Moreover, different drug combinations can lead to the distortions in the human biological passport, containing the information not only about the erythropoiesis and steroid profile, but also about catecholamine levels, which are difficult to quantify in terms of sample preparation and analysis. A method has been proposed for the determination of adrenaline and dopamine dansyl derivatives in human saliva, including the derivatization and determination of analytes by ultra-high-performance liquid chromatography (UHPLC) with high resolution mass spectrometric detection. The derivatization procedure allowed obtaining less polar catecholamine derivatives, which is especially important for their quantification by reversed-phase ultra-high-performance liquid chromatography since it ensures their better retention on the sorbent. The sensitivity of these substances quantification by the proposed method was estimated; the highest sensitivity was achieved using the mobile phase consisting of the 0.1% formic acid aqueous solution and acetonitrile. The lower limit of quantification was 5 ng/mL for dansyldrenaline and 10 ng/mL for dansyldopamine respectively. The proposed technique was tested on real saliva samples obtained from volunteers to quantify catecholamine dansyl derivatives by reversed-phase high-performance liquid chromatography with high-resolution mass spectrometric detection. High sensitivity of the technique allows using it for adrenaline and dopamine determination in clinical diagnosis.