Применение ВЭЖХ-МС/МС для определения некоторых инсулиноподобных факторов мышечного роста

Abstract

Активное развитие протеомики и геномики приводит к все большему пониманию проблемы изучения и разработки терапевтических средств на основе пептидов. В последние годы получил широкое распространение ряд низкомолекулярных пептидов, используемых в качестве факторов мышечного роста и официально включенных в список запрещенных ВАДА препаратов. Отдельно стоит отметить, что большинство из них не проходили клинических испытаний и могут быть потенциально опасными для здоровья употребляющих их людей. Рассмотрены наиболее распространенные способы определения некоторых низкомолекулярных инсулиноподобных факторов мышечного роста с использованием метода ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием. Показано, что наибольшая эффективность разделения достигается с использованием метода обращенно-фазовой жидкостной хроматографии, при этом предел обнаружения составляет 5 нг/мл. Предложен способ определения некоторых инсулиноподобных факторов мышечного роста с использованием ВЭЖХ-ЭРИ-МС/МС в режиме “Wrong-way round ionization”, обеспечивающим аналогичную чувствительность. В данном режиме ионизация осуществляется в щелочной среде с регистрацией положительных ионов, несмотря на отсутствие явного источника протонов, путем переноса протона из иона аммония в газовой фазе. Показано существенное изменение параметров удерживания определяемых веществ за счет изменения их формы нахождения в анализируемой пробе. Рассмотрена возможность применения гидрофильной хроматографии для разделения изучаемых низкомолекулярных пептидов. Установлено, что в случае применения HILIC возможно определение количества пептидов.

The recent advances in genomics and proteomics have led to an increased focus on the development of peptide therapeutics. For the last few years the usage of several low molecular weight peptides, included in WADA prohibited list, has increased dramatically. Most of them had never passed a clinical trial, and potentially can be dangerous for people. In this article, we developed a few methods of determination of several low molecular weight insulin-like growth hormones using UPLC-MS/MS. It was shown that reversed-phase liquid chromatography is the most preferred method for their separation, which can be used to achieve a 5 ng/ml limit of detection using the outlined separation and detection conditions. Wrong-way-round ionization UPLC-ESI-MS/MS method for the determination of some insulin-like human growth hormones was developed with the same sensitivity. This method can be realized in alkaline conditions with the detection of positive ions and despite the apparent lack of protons’ source, which can be taken from the ammonia ion in the gas phase. A significant change in the retention parameters was shown because of their forms of occurrence changing in the analyzed sample. The possibility of using hydrophobic interaction chromatography to separate low molecular weight peptides was studied. It was found that in the case of using HILIC it may define a limited number of peptides.