Разработка и валидация методики определения амитраза и его метаболитов в мёде методом ВЭЖХ–МС/МС

Abstract

Разработали и валидировали селективную, простую в реализации, экспрессную методику совместного определения в мёде остаточного содержания инсектицида амитраз и трех его метаболитов (ДМФФ, ДМФ и ДМА). Методика основана на жидкость-жидкостной экстракции аналитов дихлорметаном из водного раствора мёда, подщелоченного аммиаком для улучшения стабильности лабильного в кислой среде инсектицида в процессе пробоподготовки. Получаемые экстракты достаточно чистые и не требуют дополнительной очистки с использованием твердофазной экстракции либо ее вариантов. Выбор экстрагента основан на предварительном изучении распределения амитраза, ДМФФ, ДМФ и ДМА в экстракционных системах вода – органический растворитель (н-гексан, толуол, дихлорметан, хлороформ). Количественное определение осуществляется методом ВЭЖХ–МС/МС в режиме мониторинга множественных реакций с использованием матричной градуировки в диапазоне массовой доли аналитов в мёде от 25 до 250 мкг/кг. Значения предела обнаружения в зависимости от аналита составляют от 0.2 до 2.3 мкг/кг, предела определения – от 0.6 до 4.6 мкг/кг, относительного стандартного отклонения повторяемости – от 1.4 до 5.8 %, относительного стандартного отклонения промежуточной прецизионности – от 1.4 до 7.7 %, относительной расширенной неопределенности – от 9 до 22 %. Градуировочные графики линейны в диапазоне массовой доли аналитов в мёде от 25 до 250 мкг/кг. Также в процессе валидации оценили инструментальные пределы обнаружения и определения, матричный эффект, степень извлечения, общую эффективность процесса, смещение.

A selective, easy-to-implement, express method for the simultaneous determination of amitraz and its metabolites residual content in honey in the range of analytes mass fraction from 25 to 250 μg/kg has been developed and validated. The technique is based on the analytes liquid-liquid extraction with dichloromethane from alkalized aqueous solutions of honey to improve the stability of the acid-labile insecticide during sample preparation. The resulting extracts are sufficiently pure and do not require additional purification using solidphase extraction or its variants. The extractant choice is based on a preliminary study of amitraz, DMFF, DMF and DMA distribution in water-organic solvent (n-hexane, toluene, dichloromethane, chloroform) extraction systems. Quantitative determination is carried out with HPLC–MS/MS in multiple reactions monitoring mode using matrix calibration in the range of the mass fraction of analytes in honey from 25 to 250 μg/kg. Depending on the analyte, the values of the detection limit ranged from 0.2 to 2.3 μg/kg, the limit of determination was from 0.6 to 4.6 μg/kg, the relative standard deviation of the repeatability – from 1.4 to 5.8 %, relative standard deviation of intermediate precision – from 1.4 to 7.7 %, relative expanded uncertainty – from 9 to 22 %. Calibration graphs were linear in the range from 25 to 250 μg/kg. The instrumental limits of detection and determination, the matrix effect, the degree of extraction, the overall efficiency of the process, and the bias were also evaluated in the course of the validation process.