Использование твердофазной экстракции для определения используемых в спорте лекарственных средств в моче человека методом УВЭЖХ-МС/МС

Abstract

A procedure for the determination of several selective androgen receptor modulators in human urine, namely, Andarine (S-4, GTx-007), Ostarine (S-22, GTx-024, MK-2866) and Ligandrol (LGD-4033, VK-5211), as well as a phytosteroid Laxogenin and Ibutamoren (MK-677), related to non-peptide growth hormone secretagogues, has been developed. Most of these are prohibited by the World Anti-Doping Agency due to their anabolic effects. With the aim of the analytes purification and concentration, a procedure for solid-phase extraction with the use of Varian Bond Elut C8 (100 mg, 1 mL), Biotage Isolute C18 (EC) (100 mg, 1 mL) and Waters Oasis HLB (30 mg, 1 mL) cartridges was applied. To achieve good resolution of the analytes, reversed-phase ultra-high-performance liquid chromatography coupled with the triple quadrupole mass spectrometer as a detector in positive and negative ion detection modes was used. The limits of detection were in the range of 0.1-0.5 ng/mL, limits of quantification were between 0.25-0.5 ng/mL. Calibration curves were examined to be linear in the wide range of concentrations. Matrix effects were also evaluated and were found not to influence the results of the analytes quantification. The proposed method was applied for the analysis of real samples after single 15 mg oral administration of the analytes. All the analytes were positively detected in the human urine samples in 12h, thus, proving the applicability of the procedure for the analytes quantification in the urine.

Предложена методика определения в моче некоторых селективных модуляторов андрогенных рецепторов, а именно андарина (S-4, GTx-007), остарина (S-22, GTx-024, MK-2866) и лигандрола (LGD-4033, VK-5211), а также фитостероида лаксогенина и ибутаморена (MK-677), непептидого секрета гормона роста, большинство из которых запрещены к употреблению спортсменами Всемирным антидопинговым агентством по причине их анаболического действия. Для очистки и концентрирования аналитов была исследована возможность применения твердофазной экстракции с использованием патронов Varian Bond Elut C8 (100 мг, 1 мл), Biotage Isolute C18 (EC) (100 мг, 1 мл) и Waters Oasis HLB (30 мг, 1 мл). С целью достижения оптимального разделения аналитов использовали обращенно-фазовый вариант ультра-высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением тройного квадрупольного масс-спектрометра в качестве детектора в режиме регистрации положительно и отрицательно заряженных ионов. Пределы обнаружения аналитов находятся в диапазоне 0.1-0.5 нг/мл, пределы определения составляют 0.5-2.5 нг/мл. Градуировочные кривые линейны в широком диапазоне концентраций. Проведена оценка матричных эффектов на результаты определения аналитов и показано, что они не оказывают мешающего влияния на результаты определения. Методика была апробирована на реальных образцах мочи после однократного перорального употребления 15 мг действующего вещества. Спустя 12 часов во всех образцах мочи были обнаружены определяемые аналиты, их концентрации лежали в линейном диапазоне градуировочных зависимостей, что свидетельствует о возможности использования предложенной методики для определения исследуемых аналитов в моче человека.