Определение икариина в моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией

Abstract

C использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии разработан способ селективного определения икариина в пробах мочи. Для анализа биологических проб использовали обращенно-фазовый вариант высокоэффективной хроматографии на сорбентах с привитыми C18 группами. Определение осуществляли методом тандемной масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением в режиме регистрации выбранных ионных переходов для положительных ионов (энергия соударений - 40 %, ионный переход - с m/z = 677.2433 → 313.0703 (100 %), 369.1330 (35 %)). Выбрана процедура пробоподготовки, включающая в себя твёрдофазную экстракцию на картриджах SUPELCO HLB, концентрирование органического экстракта в токе азота и перерастворение сухого остатка. Предел детектирования составил 1 нг∙мл⁻¹. При валидации методики оценивали степень извлечения икариина из биологической жидкости (97 %), селективность и специфичность определения целевого соединения, а также влияние матрицы на ионизацию (4 %).

Using the liquid chromatography tandem mass spectrometry, the approach for the selective detection of icariin in urine samples was developed. Biological samples analysis was performed by the reversed-phase chromatography using the C18 sorbent. The method of tandem mass spectrometry with the multiple reaction monitoring (MRM) mode using the electrospray ionization technique in positive ion mode was used (the collision energy - 40 %, m/z = 677.2433 → 313.0703 (100 %), 369.1330 (35 %)). The sample preparation procedure comprising of the solid-phase extraction based on SUPELCO HLB cartridges, the evaporation of the organic extract in a stream of nitrogen and the reconstitution of residue was selected. The detection limit was 1 ng ml⁻¹. During the method validation, the extraction of icariin from a biological fluid (97%), the selectivity and the specificity of the target compound as well as the matrix effects of ionization (4 %) were studied.